D. Yu. Ryazantsev, E. M. Chudinova, L. Yu. Kokaeva, S. N. Elansky, P. N. Balabko, G. L. Belova, S. K. Zavriev
Kuvu wa phytopathogenic Colletotrichum coccodes husababisha magonjwa hatari katika viazi na nyanya inayojulikana kama anthracnose na doa jeusi kwenye mizizi. Kwa sifa za morphological, mara nyingi ni vigumu kutofautisha na magonjwa yanayosababishwa na microorganisms nyingine; juu ya matunda ya nyanya ya kijani, ugonjwa huo unaweza kuwa usio na dalili, ukijidhihirisha tu kwenye matunda nyekundu yaliyoiva. Kwa utambuzi wa haraka na sahihi wa pathojeni, mfumo wa mtihani wa PCR wa wakati halisi hutolewa. Ili kuendeleza mfumo wa majaribio, mlolongo wa nyukleotidi wa jeni la glycerol trifosfati dehydrogenase ya 45 C. aina ya kokodi iliyotengwa na mizizi ya viazi katika mikoa tofauti ya Urusi iliamuliwa.
Kulingana na matokeo yaliyopatikana na uchanganuzi wa mfuatano sawa wa spishi zingine zinazopatikana kwenye hifadhidata ya GenBank, vianzio vya spishi mahususi na uchunguzi wa koni za C. viliundwa. Ili kuangalia umaalum wa mfumo wa majaribio ulioundwa, PCR ilifanywa na DNA iliyotengwa na tamaduni safi za aina 15 tofauti za vimelea na saprotrophic fungi zinazohusiana na mimea ya nyanya na viazi (Fusarium oxysporum, F. verticillium, Phomopsis phaseoli, Alternaria alternata, Helminthosporium solani , Colletotrichum coccodes Phellinus ferrugineovelutinus, Stemphylium vesicarium, Helminthosporium solani, Phomopsis phaseoli, Neonectria radicicola, Rhizoctonia solani, Penicillium sp., Cladosporium fulvum, C. cladosporioides). Uwepo wa DNA ya Colletotrichum coccodes iliamuliwa katika mzunguko wa kizingiti wa 20-27, wakati spishi zingine ziligunduliwa baada ya mizunguko 40 au hazikugunduliwa. Mfumo wa majaribio hufanya uwezekano wa kutambua kwa uaminifu viwango vya DNA vya C. cocodes zaidi ya 0.01 ng / mm3 katika mchanganyiko wa PCR uliochambuliwa. Mfumo wa majaribio uliotengenezwa ulitumika kuchunguza uwepo wa kokwa C. kwenye majani ya nyanya yenye dalili za magonjwa ya ukungu na kwenye mizizi ya viazi bila dalili za nje za ugonjwa. Majani yenye dalili za maambukizi ya vimelea yalikusanywa kutoka nyanja mbili tofauti katika Wilaya ya Krasnodar, mizizi - kutoka mashamba katika mikoa ya Kostroma, Moscow, Kaluga, Nizhny Novgorod. Jani moja la nyanya lililo na C. coccodes DNA lilipatikana katika Wilaya ya Krasnodar; uwepo mkubwa wa DNA ya pathojeni hii iligunduliwa katika sampuli 5 za mizizi iliyopandwa katika mikoa ya Kostroma, Moscow, Kaluga.
Utangulizi
Uyoga wa jenasi Colletotrichum ni phytopathogens hatari ambayo huathiri nafaka, mboga mboga, mimea, matunda ya kudumu na mimea ya berry. Moja ya spishi zinazopatikana kila mahali za jenasi hii, Colletotrichum coccodes (Wallr).
Hughes, ni wakala wa causative wa anthracnose na doa nyeusi ya viazi na nyanya, na husababisha magonjwa ya idadi ya mimea mingine ya familia ya Solanaceae, ikiwa ni pamoja na. magugu (Dillard, 1992). C. kokwa huathiri sehemu zote za chini ya ardhi za mmea, misingi ya shina, majani na matunda (Andrivon et al., 1998; Johnson, 1994). Kwenye peel ya mizizi ya viazi iliyoambukizwa, ukuaji wa matangazo ya kijivu na kingo zilizotamkwa huzingatiwa, ambayo dots nyeusi za sporulation na microsclerotia zinaonekana wazi. Wakati wa kuhifadhi, vidonda vilivyo na laini vinaweza kuunda kwenye massa ya mizizi, i.e. ugonjwa huingia katika awamu ya anthracnose, ambayo, hata hivyo, ni nadra sana.
Wakati huo huo, dalili za anthracnose (vidonda vya ngozi na dots ndogo nyeusi) ni mfano wa matunda ya nyanya. Kwenye majani, dalili za C. cocodes huonekana kama madoa ya hudhurungi, ambayo kwa kawaida hupakana na tishu za manjano (Johnson, 1994).
Ukuaji wa doa nyeusi kwenye mizizi huharibu mwonekano wao, ambao hutamkwa haswa wakati wa kuuza viazi zilizosafishwa zenye peel nyekundu. Upungufu wa maganda husababisha kuyeyuka kupita kiasi na kuongezeka kwa upotezaji wa uhifadhi (Njaa na McIntyre, 1979). Uharibifu kwa viungo vingine vya mimea husababisha upotevu wa mavuno, ambayo ilibainika katika ardhi iliyo wazi na iliyofungwa (Johnson, 1994; Tsror et al., 1999). Magonjwa yanayosababishwa na C. kokwa ni ya kawaida katika karibu mikoa yote ya dunia inayozalisha viazi, ikiwa ni pamoja na Urusi (Leesa, Hilton, 2003; Belov et al, 2018). Udhibiti wa magonjwa haya ni mgumu kutokana na kutokuwa na ufanisi wa kutosha wa viua kuvu dhidi ya C. kokwa na ukosefu wa aina sugu (Soma, Ficha, 1995).
Chanjo ya C. cocodes inaweza kudumu kwenye mizizi ya mbegu (Soma, Ficha, 1988; Johnson et al., 1997), mbegu za nyanya (Ben-Daniel et al., 2010), kuishi kwa muda mrefu kwenye udongo, kwenye uchafu wa mimea. (Dillard, 1990; Dillard, Cobb, 1993) na katika magugu (Raid, Pennypacker, 1987). Kazi za waandishi kadhaa (Soma, Ficha, 1988; Barkdoll, Davis, 1992; Johnson et al., 1997; Dillard, Cobb, 1993) zimeonyesha kuwa ukuaji wa ugonjwa katika viazi na nyanya hutegemea sana uwepo. chanjo kwenye udongo na mbegu. Kwa hiyo, ili kupunguza hasara kutokana na ugonjwa huo, ni muhimu kutambua (ikiwa ni pamoja na kiasi) propagules ya Kuvu katika nyenzo za mbegu, kwenye udongo, kwenye mizizi ya viazi ya mbegu na mbegu za nyanya zilizowekwa kwa ajili ya kuhifadhi. Uchunguzi wa morphological katika udongo na nyenzo za mimea unaweza kufanyika tu kwa uwepo wa microsclerotia, ambayo, hata hivyo, pia hupatikana katika aina nyingine za fungi.
Dalili kwenye mizizi ni sawa na upele wa fedha unaosababishwa na Kuvu Helminthosporium solani. Kutenga kokwa za Colletotrichum na Helminthosporium solani katika utamaduni safi ni ngumu sana na huchukua muda mrefu kwa sababu ya ukuaji wa polepole kwenye lishe. Ili kutambua haraka coccodes ya Colletotrichum, ni muhimu kutumia njia za uchunguzi wa vyombo. Njia rahisi zaidi ni mmenyuko wa mnyororo wa polymerase (PCR) na marekebisho yake - PCR ya wakati halisi. Hivi sasa, mfumo wa majaribio uliotengenezwa na watafiti wa Uingereza (Cullen et al., 2002) kwa eneo la ITS1 la rDNA unatumika Ulaya na Marekani. Matumizi yake yameonyesha matokeo mazuri katika uchambuzi wa pekee wa Kirusi (Belov et al, 2018). Hata hivyo, C. codes ni tofauti sana na ugunduzi wake kutoka kwa mlolongo mmoja wa DNA unaweza kusababisha matokeo mabaya ya uongo. Kwa utambuzi wa kuaminika zaidi, ni muhimu kuchambua mlolongo wa aina kadhaa za DNA, kuhusiana na ambayo tumeanzisha mfumo wa awali wa mtihani ambao unaruhusu kutambua koti za C. kwa mlolongo wa gene ya glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase.
nyenzo na njia
Ili kutathmini ufanisi na upekee wa mifumo ya majaribio iliyoundwa, tulitumia tamaduni safi za aina 15 za uyoga zilizotengwa na waandishi kutoka kwa sampuli za ugonjwa wa majani ya nyanya na matunda, mizizi ya viazi (Jedwali 1). Kwa kutengwa, tulichukua viungo vya mimea na dalili za maambukizi ya vimelea, si zaidi ya chombo kimoja kwa kila kichaka.
Kipande cha kiazi kilicho na peel, kipande cha tunda la nyanya, na jani lililoathiriwa viliwekwa chini ya darubini ya darubini, baada ya hapo mycelium, spores, au kipande cha tishu kilihamishiwa kwenye agar medium (wort agar) kwenye chombo. Sahani ya Petri yenye sindano ya kukagua yenye ncha kali. Vitenga vilihifadhiwa kwenye safu ya agar kwenye mirija ya majaribio kwa 4 ° C.
Sampuli za majani ya nyanya na dalili za magonjwa ya vimelea, yaliyokusudiwa kwa uchambuzi, mara baada ya kukusanya (kwenye shamba) ziliwekwa katika pombe ya ethyl 70% ambayo ilihifadhiwa hadi kutengwa kwa DNA. Mizizi ya viazi ilipelekwa kwenye maabara, ikavuliwa (kipande 2 × 1 cm) kutoka kwao, na kugandishwa kwa -20 ° С. Imehifadhiwa hadi kutengwa kwa DNA.
Tamaduni safi za kuvu kwa kutengwa kwa DNA zilikuzwa katika kati ya pea ya kioevu. Mycelium ya Kuvu ilitolewa kutoka kwa njia ya kioevu, kukaushwa kwenye karatasi ya chujio, iliyogandishwa katika nitrojeni ya kioevu, iliyotiwa homogenized, incubated katika CTAB buffer, iliyosafishwa na kloroform, iliyosababishwa na mchanganyiko wa isopropanol na 0.5 M acetate ya potasiamu, iliyoosha mara mbili na 2%. pombe. DNA iliyosababishwa iliyeyushwa katika maji yaliyotengwa na kuhifadhiwa kwa -70 ° С (Kutuzova et al., 20). Mkusanyiko wa DNA ulipimwa kwa kutumia hesabu ya HS DNA ya DNA iliyokwama mara mbili kwenye Qubit 2017 (Qiagen, Ujerumani). Sampuli za pombe na zilizogandishwa zilitiwa nitrojeni kioevu, kisha uchimbaji wa DNA ulifanyika kama ilivyoelezwa hapo juu (kwa mycelium ya tamaduni safi za kuvu).
Jedwali 1. Asili ya matatizo ya fungi kutumika katika kazi
Jina la uyoga | Kiwanda, chombo | Mahali pa kuchaguliwa |
---|---|---|
Kokodi za Colletotrichum 1, C. koni 2, C. koni 3, Ilyonectria crassa, Rhizoctonia solani | mizizi ya viazi | Mkoa wa Kostroma, mizizi ya viazi ya kizazi cha 1 cha shamba, aina ya Red Scarlett |
Kokodi za Colletotrichum 4 | jani la viazi | Mwakilishi Mari El, Yoshkar-Ola |
Helminthosporium solani | mizizi ya viazi | Mkoa wa Magadan, pos. Hema, mizizi ya viazi |
Cladosporium fulvum | jani la nyanya | Mkoa wa Moscow, nyanya yenye matunda makubwa |
Alternaria tomatophila | matunda ya nyanya | iliyokabidhiwa na wafanyikazi wa maabara ya mycology na phytopathology ya Taasisi ya Utafiti ya All-Russian ya Ulinzi wa Mimea. |
Fusarium verticillium, Phomopsisphaseoli, Alternaria alternata, Phellinus ferrugineovelutinus, Stemphylium vesicarium, Cladosporium cladosporioides, Acrodontium luzulae, Penicillium sp. | matunda ya nyanya | Wilaya ya Krasnodar, wilaya ya Crimea, Cream ya daraja |
Fusarium oxsporum | mzizi wa ngano | Mkoa wa Moscow |
PCR ilifanyika kwenye amplifier ya DTprime (DNA-Teknolojia). Kwa PCR, vianzio asilia na uchunguzi wa eneo mahususi la spishi ya jeni ya glycerol trifosfati dehydrogenase vilitumika: kitangulizi cha mbele Coc70gdf –TCATGATATCATTTCTCTCACGGCA, kitangulizi cha nyuma Coc280gdr - TACTTGAGCATGTAGGCCTGGCGGGT1 - FACTTGAGAGGT213 pro. Vitangulizi vinakuza eneo la XNUMX bp.
Mwitikio huo ulichukua 50 ng ya jumla ya DNA (wakati wa kuchambua majani na mizizi) na 10 ng (wakati wa kuchambua DNA kutoka kwa tamaduni safi za kuvu). Mchanganyiko wa mmenyuko (35 μl) ulitenganishwa na safu ya mafuta ya taa katika sehemu mbili: ya chini (20 μl) ilikuwa na 2 μl ya 10 × bafa ya athari (750 mM Tris-HCl, pH 8.8; 200 mM (NH4) 2SO4; 25 mM MgCl2; 0.1% Kati-20), 0.5 mm ya kila deoxynucleotide trifosfati, 7 pmol ya kila primer, na 4 pmol ya hidrolisisi uchunguzi wa umeme; ya juu ilikuwa na 1 μl ya 10 × PCR bafa na 1 U ya Taq polimasi.
Kutenganisha mchanganyiko na mafuta ya taa huruhusu zilizopo kuhifadhiwa kwa muda mrefu kwa joto la 5 ° C na kutoa mwanzo wa moto kwa PCR baada ya kuwasha moto kwa dakika 10 kwa joto la juu ya 80 ° C. PCR ilifanyika kulingana na mpango wafuatayo: 94.0 ° C - 90 s (1 mzunguko); 94.0 ° C - 30 s; 64.0 ° C - 15 s (mizunguko 5); 94.0 ° C - 10 s; 64.0 ° C - 15 s (mizunguko 45); 10.0 ° C - hifadhi.
matokeo na majadiliano
Mlolongo wa jeni ya glycerol triphosphate dehydrogenase iliamuliwa katika aina 45 zilizotengwa na majani, shina, mizizi ya viazi na matunda ya nyanya (Kutuzova, 2018) katika mikoa tofauti ya Urusi. Mlolongo uliochunguzwa wa aina zote uligawanywa katika vikundi 2 tofauti katika nyukleotidi mbili. Mlolongo wa nyukleotidi wa wawakilishi wa vikundi vyote viwili chini ya nambari KY496634 na KY496635 zimewekwa kwenye GenBank.
Vitambulisho vya kwanza vya coc70gdf, coc280gdr na uchunguzi wa cocgdz vilivyoundwa kwa misingi yao viliangaliwa kwa kutumia programu ya BLAST (www.ncbi.nlm.nih.gov/blast) kwenye mfuatano wote wa jeni ya glycerol trifosfati dehydrogenase ya spishi za Colletotrichum na viumbe vingine vinavyopatikana katika hifadhidata ya GenBank.
Hakuna sehemu za DNA za viumbe vingine ambazo zinafanana sana na vianzio na uchunguzi zilipatikana.
Unyeti wa mfumo wa majaribio uliangaliwa kwa kutumia sampuli zilizo na viwango tofauti vya C. coccodes DNA, DNA kutoka kwa jani la viazi lililoathiriwa na anthracnose (iliyokusanywa mnamo 2017 huko Mari El, aina ya Red Scarlett), na ganda la mizizi iliyoathiriwa na doa nyeusi (iliyokusanywa. katika mkoa wa Kostroma, aina ya Red Scarlett, Jedwali 2). Ili kuthibitisha uwepo wa DNA katika mizizi na majani ya viazi, aina za C. coccodes zilitengwa kutoka kwao hadi tamaduni safi.
Matokeo ya uchanganuzi wa unyeti wa mfumo wa majaribio yanaonyesha kuwa inaweza kutumika kubaini kwa mafanikio uwepo wa C. kodoksi DNA katika sampuli wakati jumla ya maudhui yake katika mchanganyiko wa PCR ni zaidi ya 0.05 ng. Hii inatosha kutambua, kwani sclerotia moja ina, kwa wastani, 0.131 ng, na spore moja ina takriban 0.04 ng ya DNA (Cullen et al., 2002). Mfumo wa mtihani uliotengenezwa na kikundi cha Kiingereza (Cullen et al., 2002) ulionyesha unyeti sawa (mzunguko wa kizingiti 34 kwa 0.05 ng DNA na 37 kwa 0.005 ng).
Uchanganuzi wa sampuli za asili zilizo na kokodi za C. katika visa vyote ulifanya iwezekane kufichua uwepo wake katika sampuli kwa uhakika (Jedwali 2). Mbinu iliyopendekezwa ya kutenganisha DNA ilitumika pia kwa uchanganuzi wa sampuli za mimea asilia.
Jedwali la 2. Uamuzi wa unyeti wa mfumo wa majaribio uliopendekezwa wa utambuzi wa koni za Colletotrichum kwa PCR ya wakati halisi.
Образец | Kiasi cha DNA katika sampuli *, ng | Mzunguko wa kizingiti | C. utambuzi wa kokwa |
---|---|---|---|
Kokodi za Mycelium Colletotrichum | 50 | 21.3 | + |
5 | 25.7 | + | |
0.5 | 29,7 | + | |
0.05 | 33.5 | + | |
0.005 | 40 | - | |
0.0005 | 42.8 | - | |
0.00005 | - | ||
Maganda ya mizizi 1 | 50 | 32 | + |
Maganda ya mizizi 2 | 50 | 30 | + |
Maganda ya mizizi 3 | 50 | 31.5 | + |
Jani la viazi | 50 | 29.5 | + |
Kumbuka. * Katika mchanganyiko wa bidhaa za PCR.
Kupima umaalum wa mfumo wa majaribio ulifanyika kwenye sampuli za DNA zilizotolewa kutoka kwa aina 15 za fungi. Aina zote za fungi zilitengwa na waandishi kutoka kwa matunda yaliyoathirika na yenye afya na majani ya nyanya, mizizi ya viazi; aina moja ilitengwa na mizizi ya ngano (Jedwali 1). Miongoni mwa wale waliotengwa na uso wa matunda, pia kuna aina ambazo sio pathogenic kwa nyanya (kwa mfano, Phellinus ferrugineovelutinus).
Uchunguzi umeonyesha kuwa DNA ya C. coccodes iligunduliwa katika mzunguko wa kizingiti wa 20-27, wakati spishi zingine za kuvu hazikugunduliwa au zilitoa ishara baada ya mzunguko wa 40, ambayo inaweza kuhusishwa na athari ya kelele isiyo maalum (Jedwali 3).
Jedwali 3. Kuangalia mfumo wa mtihani wa aina mbalimbali za uyoga
Jina la uyoga | Mzunguko wa kizingiti |
Kokoti za Colletotrichum 1 | 20.9 |
C. kodi 2 | 22.6 |
C. kodi 3 | 23 |
C. kodi 4 | 22 |
Fusarium oxsporum | > 40 |
F. verticalilliamu | > 40 |
Rhizoctonia solani | > 40 |
Phomopsis phaseoli | > 40 |
Alternaria mbadala | > 40 |
A. tomatophila | > 40 |
Helminthosporium solani | > 40 |
Phellinus ferrugineovelutinus | > 40 |
Stemphylium vesicarium | > 40 |
Ilyonectria crassa | > 40 |
Cladosporioides ya Cladosporioides | > 40 |
C. fulvum | > 40 |
Acrodontium luzulae | > 40 |
Penicillium sp. | > 40 |
Kumbuka. * Kiasi cha DNA katika sampuli zote kilikuwa 10 ng.
Mfumo wa majaribio uliotengenezwa ulitumiwa kutambua kokodi katika sampuli za jani la nyanya zenye dalili za vimelea vya necrotrophic na mizizi ya viazi mbegu bila dalili zinazoonekana. Kwa ajili ya utafiti, tulichukua mizizi ya mbegu ya aina tofauti zilizopandwa katika mikoa ya Kostroma, Moscow, Kaluga, Nizhny Novgorod. Uwepo wa C. coccodes DNA ilionekana kuwa muhimu katika sampuli, katika uchambuzi ambao mzunguko wa kizingiti haukuzidi 35. Thamani hii ya kizingiti ilichaguliwa kulingana na uamuzi wa kuaminika wa 0.05 ng ya C. coccodes DNA (mzunguko wa kizingiti 33.5; Jedwali 2) na ukweli kwamba mizunguko ya kizingiti zaidi ya 40, DNA isiyo maalum ya aina zingine za kuvu iligunduliwa. Kwa njia hii, uwepo mkubwa wa C. coccodes DNA uligunduliwa katika sampuli 5 za mizizi iliyopandwa katika mikoa ya Kostroma, Moscow, Kaluga na katika jani moja la nyanya kutoka eneo la Yeisk la mkoa wa Krasnodar (Jedwali 4, 5).
Jedwali 4. Ugunduzi wa kokwa za Colletotrichum kwenye mizizi ya viazi *
Nambari ya sampuli | Aina ya viazi | Mahali pa ukuaji | C. utambuzi wa kokwa | Mzunguko wa kizingiti |
---|---|---|---|---|
1 | Nyekundu nyekundu | Mkoa wa Kostroma | + | 35 |
2 | + | 35 | ||
3 | - | 38 | ||
4 | Sante | Mkoa wa Moscow | + | 34 |
5 | - | |||
6 | - | 41 | ||
7 | - | 41.8 | ||
8 | + | 30 | ||
9 | Zhukovsky mapema | Mkoa wa Moscow | - | 40.5 |
10 | - | 40.6 | ||
11 | - | |||
12 | Molly | Mkoa wa Kaluga | + | 34.3 |
13 | - | 38.4 | ||
14 | Ndoto | Mkoa wa Kaluga | - | |
15 | Gala | Mkoa wa Nizhny Novgorod. | - | |
16 | - |
Kumbuka. * Kiasi cha DNA katika sampuli zote kilikuwa 50 ng.
Jedwali 5. Ugunduzi wa kokwa za Colletotrichum kwenye majani ya nyanya *
Nambari ya sampuli | Mahali pa ukuaji | C. utambuzi wa kokwa | Mzunguko wa kizingiti |
---|---|---|---|
1 | Wilaya ya Krasnodar, Wilaya ya Crimea | - | |
2 | - | ||
3 | - | ||
4 | - | 45 | |
5 | - | ||
6 | - | ||
7 | - | ||
8 | - | ||
9 | Wilaya ya Krasnodar, Wilaya ya Yeisk | - | 39.2 |
10 | - | 40.8 | |
11 | - | ||
12 | - | 41.6 | |
13 | - | 40 | |
14 | - | 41 | |
15 | - | 41.9 | |
16 | - | ||
17 | - | ||
18 | - | 40.3 | |
19 | - | ||
20 | - | ||
21 | + | 34.5 | |
22 | - | ||
23 | - |
* Kiasi cha DNA katika sampuli zote kilikuwa 50 ng.
Mfumo wa majaribio ulioundwa na sisi si duni kuliko ule ulioanzishwa na watafiti wa Uingereza (Cullen et al., 2002) katika unyeti na umaalum na unafaa kwa uchanganuzi wa sampuli za mimea. Maombi yake kwa ajili ya uchambuzi wa mizizi ya mbegu ilifanya iwezekanavyo kutambua C. coccodes DNA katika mizizi bila ishara za nje za uharibifu na kuchambua kwa mafanikio maambukizi ya majani.
Hadi sasa, hakuna uchambuzi wa mizizi ya viazi kwa infestation ya C. coccodes imefanywa nchini Urusi. Utafiti wetu wa kwanza ulionyesha kuwa kati ya mizizi 16 iliyojaribiwa ya mbegu iliyopandwa katika mikoa tofauti ya Shirikisho la Urusi, 5 ina kokodo za C. Hii inaonyesha kwamba doa nyeusi ya mizizi ya viazi ni ugonjwa wa kawaida wa viazi nchini Urusi, na jukumu lake katika kupunguza kiasi na ubora wa mazao ya viazi ni duni.
Uchambuzi wa majani ya nyanya ulifunua uwepo mkubwa wa C. coccodes DNA katika jani moja kutoka Wilaya ya Yeisk ya Wilaya ya Krasnodar. Mapema, wakati wa kuchunguza mashamba ya nyanya katika kusini mwa Urusi kwa kutumia mfumo wa mtihani wa Uingereza (Cullen et al., 2002), majani yenye kokwa za C. yalipatikana, na katika baadhi ya mashamba sehemu kubwa ya majani yaliyoambukizwa na C. cocodes ilipatikana (Belov et. al., 2018). Katika Wilaya za Krasnodar na Primorsky, Mkoa wa Moscow, tulipata matunda ya nyanya, ambayo tuliweza kutenganisha tamaduni safi za C. coccodes. Inawezekana kwamba C. cocodes imeenea zaidi kwenye nyanya nchini Urusi kuliko inavyoaminika hivi sasa, na ubaya wake pia haujakadiriwa.
Kwa hiyo, hadi sasa, taarifa za kutosha zimekusanywa juu ya usambazaji mkubwa wa C. cocodes kwenye viazi na nyanya.
Ili kuelewa vizuri jukumu la Kuvu hii katika maendeleo ya magonjwa ya viazi na nyanya, ni muhimu kufuatilia kuenea kwake nchini Urusi, kujifunza jukumu la maambukizi ya udongo na mbegu, na jukumu la doa nyeusi katika hasara wakati wa kuhifadhi. Matumizi ya uchunguzi wa PCR yanaweza kuwezesha kazi hii kwa kiasi kikubwa, na matumizi ya wakati huo huo ya mifumo yote ya mtihani itaongeza kwa kiasi kikubwa usahihi wa uchambuzi.
Kazi hii iliungwa mkono na ruzuku kutoka kwa Msingi wa Sayansi ya Kirusi No. 18-76-00009.
Nakala hiyo ilichapishwa katika jarida la "Mycology and Phytopathology" (kiasi cha 54, Na. 1, 2020).